hanks液(一步蓝染色原理)
资讯
2023-12-05
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1. hanks液,一步蓝染色原理?
台盼蓝染色的原理是:台盼蓝可穿透死细胞的细胞膜,使死细胞中的DNA着色,在光学显微镜下课观察到蓝色沉淀,因此可判断此细胞已经死亡,而活细胞,台盼蓝无法进入到细胞体内,故无法使细胞的DNA着色,此外,除了台盼蓝染色鉴定细胞的活性之外,常用的方法还有MTT比色法,与台盼蓝染色原理类似,
台盼蓝染色的主要(原理)步骤:
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6. 染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100
![hanks液(一步蓝染色原理)](/static/artimg/20231130/65682691348b4.jpg)
2. 索莱宝Hanks怎么样?
Hanks 液是生物医学实验中最常用的无机盐溶液和平衡盐溶液(Balanced Salt Solution,BSS ),简称H。主要用于配制培养液,稀释剂和细胞清洗液,而不能单独作为细胞组织培养液。
索莱宝的产品口碑还不错,Hanks使用效果还行。
3. 平衡盐溶液配方?
目前常用的平衡盐溶液有乳酸钠和复方氯化钠溶液(1/6M乳酸钠溶液1/3加复方氯化钠溶液2/3);与碳酸氢钠和等渗盐水溶液(1.25%碳酸氢钠溶液1/3和等渗盐水2/3)两种。
主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。简单的BSS(balanced salt solution)是Ringer。
BSS 的配制实验:
实验方法原理:BSS 是从Ringer 生理盐水发展起来的,主要由无机盐和葡萄糖组成。BSS 中的无机离子不仅是细胞生命所需成分,而且对维持渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度方面,起着重要作用。BSS 内含少量的酚红,作为溶液酸碱度变化的指示剂;溶液变酸时呈黄色,变碱时呈紫红色,中性时呈桃红色,借此易于观察到培养液pH的变化。
实验步骤:以Hanks 液为例说明其配制方法
1. 按成分表所示,准确称量试剂;许多试剂是含有水分的水化物,与不含水分者的称量不同,应加以换算;
2. 将CaCl2 先溶解在100 ml 水中;
3. 其它成分依次溶解于750 ml 水中(注意应待前一种试剂完全溶解后,再溶解下一种成分);
4. 用数滴5.6 %的NaHCO3 溶液溶解酚红;
5. 将2缓慢倒入3中,并不时搅动,防止出现沉淀;
6. 将4加入5中;
7. 将6移入容量瓶中,补足水充分混匀;
8. 分装瓶中,8 磅10 分钟高压蒸气灭菌,4℃冰箱内保存。
4. GKN溶液作用?
Hanks:平衡盐溶液—无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动植物细胞的水平,可作为动植物细胞短期培养(保存)。Hanks 与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致,且配方简单,是组织培养基本用液,常用于配制培养基及其他用液,或洗细胞等,细胞在Hanks中可生存几个小时。 GKN:平衡盐缓冲液,为细胞提供一个合适的缓冲环境,也起着调节渗透压的作用。
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1. hanks液,一步蓝染色原理?
台盼蓝染色的原理是:台盼蓝可穿透死细胞的细胞膜,使死细胞中的DNA着色,在光学显微镜下课观察到蓝色沉淀,因此可判断此细胞已经死亡,而活细胞,台盼蓝无法进入到细胞体内,故无法使细胞的DNA着色,此外,除了台盼蓝染色鉴定细胞的活性之外,常用的方法还有MTT比色法,与台盼蓝染色原理类似,
台盼蓝染色的主要(原理)步骤:
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6. 染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100
2. 索莱宝Hanks怎么样?
Hanks 液是生物医学实验中最常用的无机盐溶液和平衡盐溶液(Balanced Salt Solution,BSS ),简称H。主要用于配制培养液,稀释剂和细胞清洗液,而不能单独作为细胞组织培养液。
索莱宝的产品口碑还不错,Hanks使用效果还行。
3. 平衡盐溶液配方?
目前常用的平衡盐溶液有乳酸钠和复方氯化钠溶液(1/6M乳酸钠溶液1/3加复方氯化钠溶液2/3);与碳酸氢钠和等渗盐水溶液(1.25%碳酸氢钠溶液1/3和等渗盐水2/3)两种。
主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。简单的BSS(balanced salt solution)是Ringer。
BSS 的配制实验:
实验方法原理:BSS 是从Ringer 生理盐水发展起来的,主要由无机盐和葡萄糖组成。BSS 中的无机离子不仅是细胞生命所需成分,而且对维持渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度方面,起着重要作用。BSS 内含少量的酚红,作为溶液酸碱度变化的指示剂;溶液变酸时呈黄色,变碱时呈紫红色,中性时呈桃红色,借此易于观察到培养液pH的变化。
实验步骤:以Hanks 液为例说明其配制方法
1. 按成分表所示,准确称量试剂;许多试剂是含有水分的水化物,与不含水分者的称量不同,应加以换算;
2. 将CaCl2 先溶解在100 ml 水中;
3. 其它成分依次溶解于750 ml 水中(注意应待前一种试剂完全溶解后,再溶解下一种成分);
4. 用数滴5.6 %的NaHCO3 溶液溶解酚红;
5. 将2缓慢倒入3中,并不时搅动,防止出现沉淀;
6. 将4加入5中;
7. 将6移入容量瓶中,补足水充分混匀;
8. 分装瓶中,8 磅10 分钟高压蒸气灭菌,4℃冰箱内保存。
4. GKN溶液作用?
Hanks:平衡盐溶液—无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动植物细胞的水平,可作为动植物细胞短期培养(保存)。Hanks 与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致,且配方简单,是组织培养基本用液,常用于配制培养基及其他用液,或洗细胞等,细胞在Hanks中可生存几个小时。 GKN:平衡盐缓冲液,为细胞提供一个合适的缓冲环境,也起着调节渗透压的作用。
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